Diabetologia：激活但功能受损的知觉Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现口内诱发到经常出现1标准型高血压病理病征的重大突破率在学龄前时代就有很好的详细描述，多个口内诱发非典型的学龄前中所有70%在血清转换后10在短期内患上高血压，而随访15年的学龄前这一数量上升到84%。相对于之下，占病理1标准型高血压一半以上的标准型1标准型高血压的患病两组态还从未得不到充分的研究工作。

越来越多的人开始采用仍须系统来定义1标准型高血压的重大突破：个体在经常出现多种口内诱发时转回第1期中，经常出现血糖所致时转回第2期中，经常出现病征时转回第3期中。一些多发口内诱发非典型的个体，在1期和2期，重大突破较比较慢，并转变为患病的1标准型高血压。我们早先详细描述了都由在首次检测到多种口内诱发样本后仅仅10年无高血压的想像中比较慢重大突破者，这两组病征人数少，但相似性非常明确。随后，我们发现口内自身肝细胞抗体CD8+T细胞膜反应在重大突破缓比较慢的病征中所基本不长期存在，但在未来会患病和长期长期存在的高血压病征中所很容易检测到。这或许表明，与重大突破病征相对于，这些病征诱发反应的抑制增强。

早期研究工作表明，尽管抑制性T细胞膜(Treg)数量正常，但高血压病征长期存在一些功用缺陷，其中所最主要对IL-2的反应能力降低。此外，高血压病征中所的畸变CD4+T细胞膜或许对抑制更具抵抗性，表现为畸变T细胞膜的消除减弱，自然产生的Treg和体外产生的抑制Treg，以及肝细胞经历的CD4+T细胞膜中所IL-2反应减弱。本研究工作的目的是详细描述了CD4+抑制性T细胞膜(Treg)在一小群想像中缓比较慢重大突破者中所的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群为基础的纵向研究工作，在21岁以下肺癌的病征血亲中所定期检查1标准型高血压的危险因素。我们早先详细描述了长期缓比较慢重大突破者的相似性，他们维持多重口内诱发非典型超过10年，但从未经常出现高血压的病理病征，比较慢性或非进行性诱发。随后，10名继续维持无高血压并想要提供大量血液样本的缓比较慢重大突破者确立T和B细胞膜功用分析。在迄今的研究工作中所，8名比较慢重大突破者(SP两组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内诱发非典型。所有的发起者都处于1标准型高血压重大突破的1期，尽管一些人随后失去了口内诱发对某些肝细胞的非典型反应，然而，一名病征已经处于2期仅仅6年，但从未经常出现病理病征，一名病征被诊断为高血压，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在建模中所对该遗传物质进行了直接风险评估。裂解外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多参数流式细胞膜奥义和T细胞膜消除飞行测试风险评估遗传物质中所Treg的Hz、表标准型和功用。采用FlowSOM和CITRUS(聚类核对、表征和回归)进行无指派聚类分析，风险评估Treg表标准型。

结果：与保健遗传物质相对于，来自比较慢重大突破体的失忆CD4+T细胞膜的指派聚类揭示，转录的失忆CD4+ TregHz上升，与持续性抑制的TNFR特别蛋白(GITR)说明上升有关。一名HbA1c升高的病征与重大突破缓比较慢者和匹配的对照两组相对于，Treg谱有所不尽相同。功用分析表明，与保健遗传物质相对于，来自缓比较慢重大突破体的Treg激已逝的CD4+畸变T细胞膜消除明显受损。表现为对畸变CD4+T细胞膜CD25和CD134说明的消除上升。

所示1 深入的表标准型分析揭示，CD4+Treg亚标准型在比较慢重大突破函数调用中所上升。由FlowSOM降解的Treg室，聚集在来自所有遗传物质的已逝CD4+CD45RA -细胞膜上。根据上标物说明核对出10个元簇:失忆T细胞膜_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞膜;HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)采用9个不尽相同Treg上标降解的10个元簇的MST。每个节点均是由一个集群(100个集群)，极大的元集群(10个元集群)在节点两组周围着色。每个节点中所的饼所示说明单个上标的说明级别。(b)每个元聚类的热所示，以揭示主体上标说明。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)降解所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的很薄。(e-l)相对于之下丰度为每个metacluster箱两条路线所示(丰度> 0.05%)确定为HD和SP两组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞膜(l)。黄色圆点均是由人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon都由符号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 采用CITRUS的预测模标准型证实，TregHz的上升是重大突破缓比较慢的标志。分级除此以外(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP发起者和匹配的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个体的均是由性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR说明进行裂解，各种类型FlowSOM个体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)两组以及遗传物质SP 606(黄色)中所CD25+ cd127的Hz汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外可数的箱两条路线所示;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3说明强度着色，圆圈明显的簇被识别为SP和HD函数调用之间的不尽相同。(j)箱两条路线所示揭示了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组中所，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相对于之下丰度(数量)。(k)直方所示揭示每个簇的表标准型(粉红色)和Treg上标相对于之下说明与或多或少说明(黄色);上列，内核Treg_3;下面悄悄，内核Treg_4。或多或少与所有其他簇中所上标的说明有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon都由符号秩检验

所示3 与保健献血者相对于，重大突破缓比较慢者失忆treg的GITR上升。每个失忆CD4+T细胞膜元簇(失忆T细胞膜_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞膜;HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个说明上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的说明热所示(sp606不最主要在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR说明串联，揭示直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon都由符号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有遗传物质最主要，p< 0.05(黄色)遗传物质SP 606和匹配的HD不最主要在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR说明，从分级除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)串联，揭示直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon都由符号秩检验

所示4 来自缓比较慢重大突破的CD4+ treg细胞膜操纵畸变CD4+T细胞膜的能力降低。SP两组用黄色的两条路线和圆点说明，HD两组用黄色的两条路线和圆点说明，黄色的两条路线/圆点说明遗传物质sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行分选。CD4+CD25−(此番者)被上标为CFSE, Treg按观察的数量硫酸铜。用抗CD3 /28微珠转化细胞膜，培训3天后进行流式细胞膜奥义检测。(a-d)与CD4+此番者相对于之下应的treg培训(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培训。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE消除百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除百分比。采用非典型对照(转录的响应细胞膜不含treg)计算出来消除百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 畸变CD4+T细胞膜对缓比较慢重大突破的T细胞膜转化的消除更敏感。SP两组用黄色的两条路线和圆点说明，HD两组用黄色的两条路线和圆点说明，黄色的两条路线/圆点说明遗传物质sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel上标，treg按观察的数量硫酸铜。用抗CD3 /28微珠转化细胞膜，培训3天后进行流式细胞膜奥义(CD25反染)和细胞膜因长子分析。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同培训。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE消除前年(b)。(c,d) CD25消除前年(c)和CD134消除前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中所的说明。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自缓比较慢重大突破长子的转化失忆CD4+Treg在GITR说明中所得不到了扩展和多样化，重申了全面性研究工作Treg在1标准型高血压风险个体中所的系统性的必要性。

出处出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28